MB50353.1 v.A

  細胞逆轉錄酶（REVERSE TRANSCRIPTASE）活性熒光定量檢測試劑盒

產品說明書（中文版）

主要用途

  細胞逆轉錄酶（REVERSE TRANSCRIPTASE）活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過雙鏈分子底物，在dTTP的參與下，通過逆轉錄酶的催化，聚合產生RNA-DNA異源雙鏈DNA分子，由PicoGreen特異染色，即采用熒光法來測定細胞裂解樣品中酶活性的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞裂解懸液樣品（動物、人體、昆蟲等）逆轉錄酶的活性，以及抑制劑檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

逆轉錄酶（REVERSE TRANSCRIPTASE；EC2.7.7.49），又稱為RNA依賴性DNA聚合酶（RNA-dependent DNA polymerase），是將單鏈RNA分子轉錄為雙鏈DNA的DNA聚合酶，包括HIV逆轉錄酶、莫洛尼氏鼠白血病病毒（Moloney murine leukemia virus；MMLV）逆轉錄酶、禽類成髓細胞瘤病毒（avian myeloblastosis virus；AMV）逆轉錄酶、端粒酶逆轉錄酶（telomerase reverse transcriptase） 等。逆轉錄病毒使用逆轉錄酶達到逆轉錄RNA為DNA，然后整合到宿主基因組再復制。在真核生物中，端粒酶是一種逆轉錄酶。逆轉錄酶在分子生物學中得到廣泛運用。檢測逆轉錄酶活性成為病毒感染的監測手段，同時作為藥物篩選的靶標。基于由poly-A模板與oligo-dT引物構成的雙鏈分子底物，在dTTP的參與下，通過逆轉錄酶的催化，聚合產生RNA-DNA異源雙鏈DNA分子（heteroduplexes），由PicoGreen特異染色，根據熒光強度分析（激發波長480nm，散發波長520nm），來定量測定逆轉錄酶的活性。 

產品內容

  清理液（Reagent A） 毫升

  裂解液（Reagent B） 毫升

  緩沖液（Reagent C） 毫升

  底物液（Reagent D） 微升

  終止液（Reagent E） 微升

  染色液（Reagent F） 微升

  稀釋液（Reagent G） 毫升

  標準液（Reagent H） 微升

產品說明書    1份

保存方式

保存  清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里；  染色液（Reagent F）避免光照；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器

細胞刮脫棒：用于細胞脫離

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織

臺式離心機：用于樣品操作

比色皿或酶標板：用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于熒光分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的  裂解液（Reagent B）置入冰槽里融化。然后進行下列操作。